Los virus
representan un grupo importante de patógenos en la fauna silvestre debido a su
capacidad de adaptarse a nuevos hospederos y transmitirse entre especies (Cleaveland
et al., 2001). En nutrias (Mustelidae: Lutrinae) se han reportado virus
como Morbillivirus, Influenzavirus A y Coronavirus en diferentes
regiones del mundo (Capuano et al., 2017; de Mello
et al., 2022; Lanszki et al., 2022; Li et al., 2014; Padilla-Blanco et al.,
2022; Stout et al., 2021; Thomas et al., 2020; United States Department of
Agriculture, 2021). Sin embargo, actualmente no existen
datos sobre la presencia de estos virus en nutrias en Costa Rica. La cuenca del
río Peñas Blancas (CRPB), en el norte de Costa Rica, constituye un hábitat
importante de agua dulce para la nutria neotropical Lontra longicaudis (Navarro et al., 2017), especie que desempeña
un papel clave como depredador superior. No obstante, enfrenta presiones
crecientes como la fragmentación del hábitat, la contaminación y las
actividades humanas en los alrededores de la cuenca (Barrientos, 2003; Navarro et al., 2017). Estudios
previos en la CRPB detectaron genes de resistencia a antimicrobianos (Guizado-Batista et al., 2024) y a
pesticidas (Guizado-Batista et al., 2025), lo que
sugiere presiones antropogénicas en el ecosistema. En este contexto,
investigamos la presencia de Influenzavirus A, Morbillivirus y Coronavirus
en heces de nutria de la CRPB para generar datos de referencia y evaluar su
potencial como centinelas de la circulación viral en ecosistemas de agua dulce.
Durante 2022-2023 recolectamos
muestras fecales (n = 58) de forma no invasiva a lo largo de los ríos que
componen la cuenca del río Peñas Blancas (10°15'–10°32' N, 84°28'–84°48' O),
Costa Rica. Previamente a la recolección de muestras y con el apoyo de
habitantes locales, realizamos visitas de reconocimiento en la región para
recopilar información sobre la presencia y los avistamientos de la especie. Posteriormente,
recorrimos las riberas de los ríos para identificar posibles letrinas, en donde
localizamos excretas depositadas sobre rocas de gran tamaño, de coloración
variable, del verde oscuro al negro, con abundante presencia de escamas con
espinas y un característico e intenso olor a pescado (Briones-Salas et al., 2013; Navarro et al., 2017). Todos los puntos de recolección se describen en la Figura 1 del Material Suplementario. Abarcamos tanto las
secciones superiores boscosas de la cuenca como las medias e inferiores con
impacto humano. Durante los recorridos en la parte alta de la cuenca, registramos
huellas de felinos silvestres que, según sus características morfológicas,
podrían corresponder a puma (Puma concolor) u ocelote (Leopardus
pardalis). Asimismo, registramos la presencia de perros domésticos (Canis
lupus familiaris) en las regiones media y baja, lo que evidencia la
interacción entre la fauna silvestre y los animales domésticos en la CRPB. Analizamos
las muestras de acuerdo con las regulaciones costarricenses (permisos
R-CM-UNA-002-2022-OT-CONAGEBIO, R-CM-UNA-008-2022-OT-CONAGEBIO y
R-CM-UNA-002-2023-OT-CONAGEBIO).
Confirmamos la identidad de Lontra
longicaudis mediante PCR en punto final dirigida a la región control
mitocondrial (D-loop), utilizando los cebadores ProL
(5′-CACCACCAACACCCAAAGCT-3′) y DLH (5′-CCTGAAGTAAGAACCAGATG-3′) (Guizado-Batista et al., 2024; Valqui, 2010).
Realizamos las reacciones con PCR Master Mix 2X (Thermo Scientific) en un
volumen final de 25 µL, empleando 2 µL de ADN y 0,32 mM de cada cebador.
Obtuvimos el ARN total con el kit Zybio Nucleic Acid Extraction. Confirmamos la
presencia de ARN mediante electroforesis en gel de agarosa al 1%, como se
observa en la Figura 2 del Material Suplementario. Determinamos la
concentración mediante espectrofotometría NanoDrop. Posteriormente, realizamos
la detección viral mediante protocolos de RT-PCR establecidos previamente por el
Laboratorio de Virología de la Universidad Nacional para cada virus y par de cebadores:
Influenzavirus A (Fouchier et al., 2000), Morbillivirus (Reidarson et al., 1998) y Coronavirus (Vijgen et al., 2008). Validamos
los ensayos con controles virales positivos del Laboratorio de Virología de la
Universidad Nacional (Morbillivirus y Coronavirus) y con una cepa de
antígeno de Influenzavirus A aviar proporcionada por National Veterinary
Services Laboratories (NVSL), Ames, Iowa. Utilizamos cebadores y perfiles de
amplificación específicos (TABLAS 1 y 2 del Material Suplementario). Visualizamos
los productos de PCR mediante electroforesis en geles de agarosa al 2% en
tampón TBE 1X.
No detectamos virus de la Influenza
A, Morbillivirus o Coronavirus en las 58 muestras analizadas (Figuras 3,
4 y 5 del Material Suplementario). Nuestro estudio
constituye la primera vigilancia viral de Lontra longicaudis en Costa
Rica, realizada en la cuenca del río Peñas Blancas. En Costa Rica, el virus de
la Influenza A se ha detectado en cerdos domésticos (Sus scrofa domestica)
de granjas comerciales y de traspatio (León et al., 2011). Morbillivirus se
ha reportado en perros domésticos (Canis lupus familiaris) (Berrocal
& López, 2003), felinos silvestres como el jaguarundi (Herpailurus yagouaroundi),
ocelote (Leopardus pardalis) y puma (Puma concolor) (Avendaño et
al., 2016), así como en mapaches (Procyon lotor), zorros grises (Urocyon
cinereoargenteus) (Aguilar-Vargas et al., 2022) y coatíes (Nasua
narica) (Aguilar-Vargas et al., 2022; Rojas et al., 2021). Coronavirus se ha detectado en murciélagos frugívoros (Artibeus
jamaicensis) y nectarívoros (Glossophaga soricina) (Moreira-Soto et al., 2015). Estas
observaciones confirman la exposición de las nutrias a una amplia gama de virus
de ARN (Padilla-Blanco et al., 2022).
Dado que la cuenca presenta un
alto grado de fragmentación asociado a actividades humanas
que podrían favorecer la dispersión y la transmisión de patógenos, es
fundamental dar continuidad a los programas de monitoreo en la zona. Aunque los
resultados obtenidos sugieren que la población de nutrias presenta un buen
estado sanitario, la ausencia de detección de virus en este estudio podría estar
relacionada con el número limitado de muestras y con la baja calidad de algunas
de ellas, posiblemente afectadas por la exposición prolongada a condiciones
ambientales que degradan el material genético. Por ello, el monitoreo constante
en la CRPB permitirá anticipar y prevenir brotes virales, al tiempo que
contribuirá al fortalecimiento de las estrategias de conservación y manejo de
esta especie amenazada.
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos al Deutscher
Akademischer Austauschdienst (DAAD) por el apoyo a Andrea Porres-Camacho, al
Área de Conservación Arenal Huetar Norte (SINAC) por autorizar la recolección
de muestras, al Instituto Costarricense de Electricidad (ICE) y al Centro
SOLTIS (Texas A&M University) por el apoyo de campo. Este trabajo fue
financiado por el Fondo Institucional de Desarrollo Académico (FIDA),
Universidad Nacional, proyecto 0548-20.
ÉTICA,
CONFLICTO DE INTERESES Y DECLARACIÓN DE FINANCIAMIENTO
Declaramos cumplir con los
requisitos éticos y legales, no tener conflictos de interés y haber detallado
las fuentes de financiación en los agradecimientos. Aceptamos la versión final
del manuscrito. Contribuciones: A.P.C.: muestreo, análisis y redacción inicial.
C.J.S.: análisis y edición. K.B.P.: redacción, gestión y financiamiento.
A.M.M.: logística y muestreo. C.S.B.: redacción y edición.
REFERENCIAS
Aguilar-Vargas, F., Solorzano-Scott, T., Baldi, M., Barquero-Calvo,
E., Jiménez-Rocha, A., Jiménez, C., Piche-Ovares, M., Dolz, G., León, B.,
Corrales-Aguilar, E., Santoro, M., & Alfaro-Alarcón, A. (2022). Passive
epidemiological surveillance in wildlife in Costa Rica identifies pathogens of
zoonotic and conservation importance. PLOS One, 17(9). https://doi.org/10.1371/journal.pone.0262063
Avendaño, R., Barrueta, F., Soto-Fournier,
S., Chavarría, M., Monge, O., Gutiérrez-Espeleta, G. A., & Chaves, A.
(2016). Canine distemper virus in wild felids
of Costa Rica. Journal of Wildlife Diseases, 52(2), 373–377.
https://doi.org/10.7589/2015-02-041
Barrientos, F. R. (2003). Caracterización
de los sistemas productivos y de las prácticas culturales en la subcuenca del
río Peñas Blancas, cuenca del río San Carlos. Pensamiento Actual, 4(5).
https://archivo.revistas.ucr.ac.cr/index.php/pensamiento-actual/article/view/8305
Berrocal, A., & López, A. (2003). Pulmonary sarcocystosis
in a puppy with canine distemper in Costa Rica. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 15(3), 292–294. https://doi.org/10.1177/104063870301500314
Briones-Salas, M., Peralta-Pérez, M. A.,
& Arellanes, E. (2013). Análisis
temporal de los hábitos alimentarios de la nutria neotropical (Lontra
longicaudis) en el río Zimatán en la costa de Oaxaca, México. Therya, 4(2),
311–326. https://doi.org/10.12933/therya-13-138
Capuano, A. M., Miller, M., Stallknecht, D. E.,
Moriarty, M., Plancarte, M., Dodd, E., Batac, F., & Boyce, W. M. (2017).
Serologic detection of subtype-specific antibodies to influenza A viruses in southern
sea otters (Enhydra lutris nereis). Journal of Wildlife Diseases,
53(4), 906–910. https://doi.org/10.7589/2017-01-011
Cleaveland, S., Laurenson, M. K., & Taylor, L. H.
(2001). Diseases of humans and their domestic mammals: pathogen
characteristics, host range and the risk of emergence. Philosophical
Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences, 356(1411),
991–999. https://doi.org/10.1098/rstb.2001.0889
de Mello, M., Martinelli, T. M., de Amorim,
V. R. G., Silva, L. E., Silva, F. H. P., Xavier, A. A. C., Cubas, Z. S., de
Almeida, R. F., de Moraes, W., & Headley, S. A. (2022). Canine distemper virus and canine adenovirus type-2
infections in neotropical otters (Lontra longicaudis) from southern
Brazil. Brazilian Journal of Microbiology, 53(1), 369–375.
https://doi.org/10.1007/s42770-021-00636-7
Fouchier, R. A., Bestebroer, T. M., Herfst, S., Van
Der Kemp, L., Rimmelzwaan, G. F., & Osterhaus, A. D. (2000). Detection of
influenza A viruses from different species by PCR amplification of conserved
sequences in the matrix gene. Journal of Clinical Microbiology, 38(11), 4096–4101.
https://doi.org/10.1128/JCM.38.11.4096-4101.2000
Guizado-Batista, A., Porres-Camacho, A.,
Vargas-Villalobos, S., Cortez-Martínez, M., Umaña-Castro, R., Sancho-Blanco,
C., Solano-Campos, F., Quesada-Alvarado, F., Spínola-Parallada, M.,
Madrigal-Mora, A., Jiménez-Serrano, A., Vargas-Calvo, J., Villalobos-Sequeira,
J., Stoos, K. B., & Blanco-Peña, K. (2024). Antimicrobial-resistant genes in feces from otters (Lontra longicaudis)
within the Peñas Blancas river basin, Costa Rica. Heliyon, 10(24), e40927. https://doi.org/10.1016/j.heliyon.2024.e40927
Guizado-Batista, A., Vargas-Villalobos, S.,
Parallada, M. S., Salas-González, D., Porres-Camacho, A., Cortez-Martínez, M.,
Quesada-Alvarado, F., Umaña-Castro, R., Sancho-Blanco, C., Solano-Campos, F.,
Madrigal-Mora, A., Villalobos-Sequeira, J., Medrano-Lozano, J., &
Blanco-Peña, K. (2025). Pesticide
contamination and antimicrobial resistance: two threats to the neotropical otter
(Lontra longicaudis) in the Peñas Blancas river basin, Costa Rica. Environmental
Toxicology and Pharmacology, 117, 104743.
https://doi.org/10.1016/j.etap.2025.104743
Lanszki, Z., Lanszki, J., Tóth, G. E., Zeghbib, S.,
Jakab, F., & Kemenesi, G. (2022). Retrospective detection and complete genomic
sequencing of canine morbillivirus in eurasian otter (Lutra lutra) using
nanopore technology. Viruses, 14(7). https://doi.org/10.3390/v14071433
León, B., Chaves, G., Koster, L. G.,
Jenkins-Moore, M., Carrillo, C., & Méndez, D. (2011). Aislamiento e
identificación del virus pandémico influenza H1N1/2009 S-OIV en cerdos de
explotaciones comerciales y de traspatio en Costa Rica. Ciencias Veterinarias, 29(2). https://www.revistas.una.ac.cr/index.php/veterinaria/article/view/6040
Li, Z.-N., Ip, H. S., Trost, J. F., White, C. L.,
Murray, M. J., Carney, P. J., Sun, X.-J., Stevens, J., Levine, M. Z., &
Katz, J. M. (2014). Serologic evidence of influenza A(H1N1)pdm09 virus infection
in northern sea otters. Emerging
Infectious Diseases, 20(5).
https://doi.org/10.3201/eid2005.131890
Moreira-Soto, A., Taylor-Castillo, L.,
Vargas-Vargas, N., Rodríguez-Herrera, B., Jiménez, C., & Corrales-Aguilar,
E. (2015). Neotropical bats from Costa
Rica harbour diverse coronaviruses. Zoonoses and Public Health, 62(7),
501–505. https://doi.org/10.1111/zph.12181
Navarro, J., Spínola, M., Madrigal, A.,
& Fonseca, A. (2017). Selección de hábitat de Lontra longicaudis
(Carnivora, Mustelidae) bajo la influencia de la represa hidroeléctrica del río
Peñas Blancas y sus tributarios, Alajuela, Costa Rica. Uniciencia, 31(1), 73-84
https://doi.org/10.15359/ru.31-1.8
Padilla-Blanco, M., Aguiló-Gisbert, J.,
Rubio, V., Lizana, V., Chillida-Martínez, E., Cardells, J., Maiques, E., &
Rubio-Guerri, C. (2022). The Finding of
the severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV-2) in a wild eurasian
river otter (Lutra lutra) highlights the need for viral surveillance in wild
mustelids. Frontiers in Veterinary Science, 9.
https://doi.org/10.3389/fvets.2022.826991
Reidarson, T. H., McBain, J., House, C., King, D. P.,
Stott, J. L., Krafft, A., Taubenberger, J. K., Heyning, J., & Lipscomb, T.
P. (1998). Morbillivirus infection in stranded common dolphins from the Pacific
Ocean. Journal of Wildlife Diseases, 34(4), 771–776.
https://doi.org/10.7589/0090-3558-34.4.771
Rojas, J., Morales, J. A., Argüello, M., Acevedo, S.
E., Yabsley, M. J., & Urbina, A. (2021). Histopathological findings of
infections caused by canine distemper virus, Trypanosoma cruzi, and
other parasites in two free-ranging white-nosed coatis Nasua narica
(Carnivora: Procyonidae) from Costa Rica. Journal of Threatened Taxa, 13(1),
Article 1. https://doi.org/10.11609/jott.5907.13.1.17521-17528
Stout, A. E., Guo, Q., Millet, J. K., de Matos, R.,
& Whittaker, G. R. (2021). Coronaviruses associated with the superfamily
Musteloidea. mBio, 12(1), e02873-20.
https://doi.org/10.1128/mBio.02873-20
Thomas, N., White, C. L., Jeremiah, S., Schuler, K.,
Lynch, D., Nielsen, O., Dubey, J. P., & Knowles, S. (2020). Canine
distemper virus in the sea otter (Enhydra lutris) population in
Washington state, USA. Journal of Wildlife Diseases, 56(4),
873–883. https://doi.org/10.7589/JWD-D-19-00008
United States Department of Agriculture. (2021). Confirmation
of COVID-19 in Otters at an Aquarium in Georgia. https://www.aphis.usda.gov/aphis/newsroom/stakeholder-info/sa_by_date/sa-2021/sa-04/covid-georgia-otters
Valqui, J. (2010). Primer estudio genético
de la nutria marina (Lontra felina) en la costa peruana. Revista ECIPerú, 7(1), 69-76. https://doi.org/10.33017/RevECIPeru2010.0023
Vijgen, L., Moës, E., Keyaerts, E., Li, S., & Van
Ranst, M. (2008). A pancoronavirus RT-PCR assay for detection of all known coronaviruses.
SARS- and Other Coronaviruses: Laboratory Protocols Methods in Molecular
Biology (pp 3–12). Humana Press.
https://doi.org/10.1007/978-1-59745-181-9_1
, Carlos Jiménez-Sánchez2
, Kinndle Blanco-Peña3